久久99热狠狠色一区二区_国产成人免费午夜在线观看_国产大片黄在线播放_国产精品福利视频手机免费观看

一般咱們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或安排勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準確性的*步，下面簡略介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。

1、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡略。

用無熱原、無內毒素的試管或離心管搜集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上，使血清分出。（將試管或離心管歪斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的分出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細搜集上清。主張將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復凍融。

采血過程中應防止溶血，由于紅細胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。一起也應防止細菌污染，由于菌體內可能含有內源性的HRP然后導致檢測的假陽性。

2、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標本，標本搜集后30min內4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復凍融。防止運用溶血或高血脂的標本。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

3、  細胞培養上清

取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除掉細胞碎片及雜質，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復凍融。

4、  細胞裂解液

1）  吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省掉。

2）  搜集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。

3）  參加適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前參加蛋白酶按捺劑）重懸細胞。一般6孔板一個孔的細胞量需求150~250μL PBS重懸。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫凍結樣品，重復凍融幾回，使細胞充沛裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以到達裂解的意圖。

5）  4℃ 10000×g 離心10min，除掉細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復凍融。

5、安排勻漿液

1）  將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷，洗去安排表面殘留的血液或雜質。

2）  將安排塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充沛

3）  將安排按必定的份額參加預冷的PBS（臨用前參加蛋白酶按捺劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（一般按安排分量：PBS體積=1:9的份額勻漿，例如1g的安排樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需求恰當調整，檢測后核算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）

4）  汲取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min，取上清即可檢測。

總的來說，由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應確保一切樣本均為弄清的液體，沉積或懸浮物都應離心去除。

為了確保檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測；4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。別的，還應確保樣本不含NaN3，由于NaN3會按捺HRP的活性，然后導致假陰性的成果。