今天上班時，公司接到一位elisa實驗朋友的，說雖然之前參考了大量的文獻，但是在準備做的時候還是有一點不知所錯，想請我們幫他歸納一下。

    其實做elisa實驗并不困難，只要掌握了它的技術要點，新手朋友也可以做出的elisa實驗的。下面是我司技術專員歸納的實驗技術要點，大家一起來看看吧。
    1. 準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等；
    2. 根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量；
    3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑；
    4. 標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。
   
    實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
   
    標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復溶。
   
    一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
   
     為了優(yōu)化靈敏度，建議過一夜孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
   
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