淀粉酶活力測(cè)定具體操作方法

淀粉酶原理

淀粉被淀粉水解，切斷淀粉鏈的α-1，4糖苷鍵，對(duì)dian呈藍(lán)紫色的反應(yīng)消失，這種呈色消逝的速度可以表示水解的程度，因而能衡量酶的活力。

試劑和器材

一、試劑
（1）dian原液：稱取dian11克，dian化鉀22克，加水溶解，稀釋至500毫升。
（2）稀dian液：取dian原液2毫升，加dian化鉀20克，稀釋至500毫升，此試劑隨配隨用。
（3）2%淀粉液：稱取干燥過的可溶性淀粉2克，加5毫升蒸餾水，攪拌混和，再徐徐傾入70毫升煮沸的蒸餾水中。繼續(xù)煮沸2分鐘，冷卻至室溫，加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液（PH為6）
（4）檸檬酸緩沖液：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）45.23克，檸檬酸（C6H8O7·H2O）8.068克，加水溶解，稀釋至1000毫升。
（5）標(biāo)準(zhǔn)比色液：稱取氯化鈷（CoCL2·6H2O）25克和重鉻酸鉀3.34克溶于100毫升0.01N HCL，其五倍稀釋作標(biāo)準(zhǔn)。
（6）樣品：細(xì)菌-α淀粉酶

二、器材
（1）電熱恒溫水浴 （2）試管
（3）量筒 （4）吸量管（1ml）

淀粉酶操作方法
1、取試管1支，加20毫升2%淀粉，混勻，在30℃水浴中，使管內(nèi)溫度達(dá)到30℃。
2、將淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中，混勻，在30℃水浴中保溫，自加入記時(shí)，經(jīng)5 分鐘后取反應(yīng)液1毫升，加入盛有5毫升稀dian液的試管中。混勻，目測(cè)比色，每隔一定時(shí)間重復(fù)測(cè)定，直至呈色與標(biāo)準(zhǔn)比色顏色相同為止，記錄反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間。
3、計(jì)算。在上述條件下，每一小時(shí)催化1毫升2%可溶性淀粉水解的酶量，定為一個(gè)酶活力單位。

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