原位免疫PCR的原理

 
（一）基本原理

    Sano等（1992）利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功，建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統，利用細胞工程和基因工程技術，巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合，通過構建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子，使得利用PCR技術檢測蛋白成為可能。隨后在免疫PCR的基礎上，建立了在細胞或組織原位檢測抗原的原位免疫PCR（in situ immuno-PCR）。

    原位免疫PCR是一種檢測系統，需要一種中介分子同時具有與DNA和抗體分子特異性結合的能力，其一端連接DNA,另一端連接抗原-抗體復合物，形成一個抗原-抗體-DNA連接物。作為標記的DNA分子用PCR擴增，檢測特異的PCR產物，即可間接證明抗原的存在。該技術與原位PCR不同，就是在PCR與原位雜交之間加了抗體的因素。原位PCR是先對切片或涂片進行PCR,以對組織細胞內的DNA或RNA進行擴增，使其拷貝數大大增加，然后再進行原位分子雜交。而該技術是先用特異性抗體（單抗）與相應或目的抗原反應。這個抗體在對抗原反應之前加上了人體不存在的或無關的DNA序列。抗體與抗原特異性反應后，用PCR擴增加在抗體上的DNA序列，然后再用該DNA序列的探針進行雜交檢測，也就是說用PCR及雜交的方法來放大免疫組織化學的反應，檢測目標是蛋白質。