今天上海晶抗要為您介紹的是血清分離方法。
·血清的分離
1.只有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn)的人員才能進(jìn)行這項(xiàng)工作。
2.操作時(shí)應(yīng)戴手套以及眼睛和黏膜的保護(hù)裝置。
3.規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)可以避免或盡量減少噴濺和氣溶膠的產(chǎn)生。血液和血清應(yīng)當(dāng)小心吸取，而不能傾倒。嚴(yán)禁用口吸液。
4.移液管使用后應(yīng)*浸入適當(dāng)?shù)南疽褐小Ｒ埔汗軕?yīng)在消毒液中浸泡適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，然后再丟棄或滅菌清洗后重復(fù)使用。
5.帶有血凝塊等的廢棄標(biāo)本管，在加蓋后應(yīng)當(dāng)放在適當(dāng)?shù)姆缆┤萜鲀?nèi)高壓滅菌和/或焚燒。
6.應(yīng)備有適當(dāng)?shù)南緞﹣?lái)清洗噴濺和溢出標(biāo)本
在細(xì)菌的血清鑒定中，zui常使用的方法是凝集反應(yīng)，其基本原理是細(xì)菌為顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)的抗體混合時(shí)，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。
玻片法凝集實(shí)驗(yàn)是用診斷血清在玻片上與待測(cè)細(xì)菌相混合，在電解質(zhì)存在下，若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集小塊即為陽(yáng)性，表示該菌為所用抗體的相應(yīng)細(xì)菌。此法是一種定性實(shí)驗(yàn)，方法簡(jiǎn)便快速，特異性強(qiáng)。可用于鑒定菌種及菌型。用于鑒定細(xì)菌的診斷血清有以下幾種：
1.多價(jià)診斷血清：即混合診斷血清。該血清含有兩種(或型)以上細(xì)菌的相應(yīng)抗體。一般用于細(xì)菌定群或初步分型。
2.單價(jià)診斷血清僅含一種(或型)細(xì)菌的相應(yīng)抗體。可用于細(xì)菌的定種(或型)。
3.因子診斷血清細(xì)菌含有多種抗原成分，而且不同菌群細(xì)菌之間可有共同的抗原成分。因此，通過(guò)凝集吸收實(shí)驗(yàn)，將抗血清中的共同抗體除掉，僅含一種特異性抗體的診斷血清稱為因子血清。可用于細(xì)菌分型。
[所需材料]
1.菌種豬霍亂沙門(mén)菌。
2.診斷血清沙門(mén)菌A-E多價(jià)血清，定群的6個(gè)O群因子血清，定型的H因子血清。
3.其他：0.9%氯化鈉溶液、載玻片等。
[操作方法]
1.取一潔凈載玻片，用記號(hào)筆劃兩個(gè)1—1.5cm的圓圈。
2.取1：5或1：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對(duì)照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應(yīng)適當(dāng)多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時(shí)間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。
3.用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細(xì)菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)玻片數(shù)次，1—3分鐘后觀察結(jié)果。
按上述操作方法，依次分別做A-E多價(jià)血清定屬，特異性O(shè)因子血清定群，H因子血清定型(或種)。
[結(jié)果]
陰性：對(duì)照側(cè)及實(shí)驗(yàn)側(cè)均勻混濁不出現(xiàn)凝集。
陽(yáng)性：鹽水對(duì)照側(cè)呈現(xiàn)均勻混濁，實(shí)驗(yàn)側(cè)明顯凝集。
自凝：對(duì)照側(cè)及實(shí)驗(yàn)側(cè)均出現(xiàn)凝集。
標(biāo)本的檢測(cè)，常常還需要加作一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照。觀察結(jié)果時(shí)，先觀察陰性對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照，兩個(gè)對(duì)照結(jié)果均符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，再觀察實(shí)驗(yàn)孔。
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