久久99热狠狠色一区二区_国产成人免费午夜在线观看_国产大片黄在线播放_国产精品福利视频手机免费观看

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法
上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法
更新時間:2019-08-28   點擊次數:1675次

上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法:

ELISA:酶聯免疫吸附實驗,通常用間接法。

WB:免疫蛋白印跡。
ICC:免疫細胞化學。
IHC:免疫組織化學。

  單克隆抗體由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。上海晶抗生物根據單克隆抗體實驗中細胞融合辦法給出具體步驟:歡迎參考!

(一)融合劑
  細胞融合的方法有物理法,如電融合、激光融合,化學融合法和生物融合法,如仙臺病毒,此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。

  聚乙二醇(PEG),在分子量為200~700時,呈無色、無臭的粘稠狀液體,分子量大于1 000時,呈乳白色蠟狀固體,能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑,對熱穩定,與許多化學藥品不起作用。用作細胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4 000者,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。50%濃度,pH偏堿時融合效應*。

  也有采用30%~50%濃度的PEG加上10%二甲亞砜。

  不同批號的PEG,即使分子量相同,但融合率卻有明顯差異,選用時必須注意。每批都必須進行細胞毒性試驗后方可應用。要買高純度的,一般選供氣相色譜用的PEG。

(二)融合過程

  融合的方法很多,常用的有轉動法和離心法。

  融合時脾細胞和骨髓瘤細胞的比例為1:1至10:1不等。3:1或5:1*為常用。

1.試劑與材料

(1) 供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。

(2) 1640培養液100ml。

(3) *1640液100ml。

(4) 2.5%FCS-1640液50ml。

(5) HAT培養液100ml。

(6) 50%PEG:取分子量4 000,高純度的(日本進口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高壓滅菌,使用前用預熱于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚紅檢查pH,一般不必調pH。如pH有改變,可用HCl或NaHCO3調整。

(7) 10ml和50ml的滅菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培養盤。

2.操作方法

⑴ 準備好脾細胞。

⑵ 在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞,并加入50ml 2.5%FCS-1640液。

⑶ 室溫400g離心3min,使細胞沉淀。

⑷ 移去上清液。

⑸ 輕敲管底部,使沉淀流動,把沉淀管放于40℃水浴中,使其達融合溫度。

⑹ 加預熱至40℃的50%PEG 0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見有顆粒出現,滴加過程要求持續2min。

⑺ 加1ml1640液,邊加邊搖動,持續1min。

⑻重復⑺一次。

⑼ 加1ml 1640液,邊加邊搖動,持續0.5min。

⑽ 重復⑼一次。

⑾ 加1640液15ml。

⑿ 室溫,400g離心1min,使細胞沉淀。

⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的*1640液。

⒁ 往已于前一日種有飼養細胞的40孔塑料培養盤中滴加融合的細胞液,每孔1滴(約0.05ml)。

⒂ 輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。

⒃ 第3、6、9、10日換入含HAT的*1640培養液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細胞吸出,根據需要加入適量的飼養細胞。

⒄ 于第12、15日加入含有HAT的*1640培養液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數雜交瘤細胞在10~20天內出現,但也有在1個月左右才能出現的。雜交瘤細胞出現后,吸取上清液,檢查抗體。

⒅ 對繼續生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中,依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS-1640液。同時保存于液氮和進行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產生抗體細胞的變異和丟失。

(三)細胞融合的關鍵

1.技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。

2.融合試驗*的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。

我司幾千種elisa試劑盒被全國近萬家科研單位和醫療機構應用,發表論文達數萬篇。

公司下設產品研發部、生產部、質檢部、銷售部、發貨部、財務部、后勤部,配備有大型的實驗室,各種生化儀器,ELISA試劑盒我們可以全程免費代測。我們的產品:質量保證、*、供貨及時、服務周到。

上海晶抗生物工程有限公司
  • 網站首頁
  • 關于我們
  • 新聞動態
  • 產品中心
  • 技術文章
  • 榮譽資質
  • 在線留言
  • 聯系我們

上海晶抗生物工程有限公司

地址:上海市金山工業區亭衛公路6558號9幢2441室

版權所有:上海晶抗生物工程有限公司  備案號:滬ICP備16026504號-5  總訪問量:676542  站點地圖  技術支持:智慧城市網  管理登陸

久久99热狠狠色一区二区_国产成人免费午夜在线观看_国产大片黄在线播放_国产精品福利视频手机免费观看

          9000px;">

                  欧美日韩国产综合一区二区三区 | av色综合久久天堂av综合| 亚洲黄色免费网站| 国产偷v国产偷v亚洲高清| 日韩视频一区在线观看| 欧美精品久久天天躁| 欧美午夜精品久久久| 欧美亚洲综合在线| 欧美午夜免费电影| 在线观看网站黄不卡| 91免费看片在线观看| 在线免费观看不卡av| 欧美色区777第一页| 欧美日韩在线三级| 欧美一区在线视频| 精品久久久影院| 久久久久久久久久久久久女国产乱| 欧美一二三在线| 久久综合成人精品亚洲另类欧美 | 一区二区三区四区视频精品免费| 国产精品久久久久毛片软件| 中文字幕高清一区| 亚洲精品国产高清久久伦理二区| 亚洲精品乱码久久久久久久久| 一区二区三区在线观看网站| 天天做天天摸天天爽国产一区| 蜜芽一区二区三区| 国产一区二区美女诱惑| 成人永久aaa| 欧洲精品中文字幕| 日韩欧美高清dvd碟片| 亚洲国产岛国毛片在线| 一区二区三区色| 日本vs亚洲vs韩国一区三区| 国模一区二区三区白浆| www.成人在线| 欧美一区二区三区免费| 国产人成亚洲第一网站在线播放| 亚洲人成影院在线观看| 奇米色一区二区| 成人午夜激情片| 欧美另类变人与禽xxxxx| 久久久精品免费观看| 亚洲制服丝袜av| 国产一区二区免费在线| 欧美三级一区二区| 国产性色一区二区| 奇米四色…亚洲| 91久久久免费一区二区| 26uuu另类欧美亚洲曰本| 亚洲欧美日韩国产手机在线 | 中文字幕一区二区在线播放| 亚洲综合999| 国产成人在线电影| 欧美夫妻性生活| 亚洲精品视频免费观看| 激情五月婷婷综合| 欧美日韩国产高清一区二区| 中文字幕亚洲成人| 99精品欧美一区二区三区小说| 欧美美女喷水视频| 亚洲欧美韩国综合色| 国模一区二区三区白浆| 欧美日韩高清在线播放| 亚洲精品中文字幕乱码三区| 国产精品123| 欧美不卡一二三| 日韩在线观看一区二区| 色呦呦网站一区| 亚洲色图在线视频| av欧美精品.com| 国产精品三级久久久久三级| 久久精品国产色蜜蜜麻豆| 欧美男男青年gay1069videost | 欧美国产精品专区| 久久er精品视频| 91精品欧美久久久久久动漫 | 成人18视频日本| 久久午夜羞羞影院免费观看| 看国产成人h片视频| 日韩午夜电影在线观看| 日本中文字幕一区二区视频 | 欧美熟乱第一页| 一级精品视频在线观看宜春院| 国产福利91精品| 欧美国产一区二区在线观看| 成人自拍视频在线观看| 中文一区在线播放| 91丨porny丨首页| 亚洲精品国产a| 欧洲激情一区二区| 亚洲一区二区影院| 色国产精品一区在线观看| 亚洲日本va午夜在线影院| eeuss鲁片一区二区三区在线看| 中文字幕第一页久久| 成人av在线资源| 亚洲一级电影视频| 91精品国产福利在线观看 | 免费在线看一区| 欧美一级高清片| 国产麻豆视频精品| 国产精品久久久久久久第一福利| 白白色 亚洲乱淫| 亚洲在线视频免费观看| 91精品国产欧美日韩| 国产成人亚洲综合a∨婷婷 | 久久精品人人做人人爽人人| 成人综合在线视频| 亚洲国产精品尤物yw在线观看| 欧美一区二区三区在线看| 狠狠久久亚洲欧美| 亚洲美女视频在线观看| 欧美一级生活片| av午夜精品一区二区三区| 日韩高清电影一区| 国产日韩成人精品| 欧美三级韩国三级日本三斤| 精品亚洲国内自在自线福利| 亚洲欧美中日韩| 日韩亚洲欧美一区二区三区| 成人性生交大合| 午夜欧美大尺度福利影院在线看| 欧美精品一区二区三区很污很色的| av男人天堂一区| 美国av一区二区| 亚洲激情校园春色| xnxx国产精品| 精品视频在线免费观看| 激情成人午夜视频| 亚洲国产另类精品专区| 中文字幕av免费专区久久| 欧美一级精品在线| 色香蕉久久蜜桃| 成人中文字幕合集| 久草热8精品视频在线观看| 亚洲图片激情小说| 久久嫩草精品久久久精品| 在线亚洲一区观看| 岛国av在线一区| 国内精品伊人久久久久av一坑| 亚洲综合区在线| 国产精品国模大尺度视频| 日韩一区二区免费在线电影| 欧洲视频一区二区| 91网站视频在线观看| 成人小视频在线| 极品少妇xxxx精品少妇偷拍| 午夜久久电影网| 一色桃子久久精品亚洲| www久久精品| 欧美videossexotv100| 欧美日韩免费观看一区二区三区 | 91啪亚洲精品| 处破女av一区二区| 国产成人鲁色资源国产91色综 | 亚洲欧美日韩久久| 国产女同互慰高潮91漫画| 久久综合久久99| 日韩欧美区一区二| 3d成人动漫网站| 51久久夜色精品国产麻豆| 欧美日韩黄色影视| 欧美一级精品大片| 日韩美一区二区三区| 精品伦理精品一区| 久久日韩粉嫩一区二区三区| 亚洲精品一区二区三区在线观看| 日韩一级片在线观看| 日韩欧美成人午夜| 久久久噜噜噜久噜久久综合| 国产三级一区二区| 国产午夜精品久久| 国产精品丝袜久久久久久app| 国产欧美视频一区二区| 国产精品久久久久久妇女6080| 国产日韩av一区二区| 国产精品国产三级国产aⅴ中文| 国产精品网站在线观看| 1024亚洲合集| 亚洲成av人影院在线观看网| 日韩精品91亚洲二区在线观看| 美女视频免费一区| 国产美女视频91| 91在线观看污| 欧美日韩精品久久久| 精品久久久久av影院| 国产精品日日摸夜夜摸av| 亚洲香肠在线观看| 蜜桃视频第一区免费观看| 国产精品99久久久久久有的能看| www.欧美日韩| 欧美一区二区在线不卡| 日本一区二区免费在线| 夜夜精品视频一区二区| 蜜桃精品在线观看| 972aa.com艺术欧美| 91精品国产91久久综合桃花 | 99视频一区二区| 欧美色涩在线第一页|