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          晶抗生物詳解檢測型特異性抗體
          更新時間:2020-03-18   點擊次數:1287次

          檢測型特異性抗體基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體( 聚苯乙烯微量反應板 )表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

          1、競爭:

          此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。

          其基本程序為:

          抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

          加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

          加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

          用ELISA試劑盒檢測儀測定OD值。

          被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定,如果待檢溶液中抗原越多,被結合的標記抗原的量就越少,有色產物就減少,這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。

          此法的優點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記,而且因為抗原的結構不同,還需應用不同的結合方法。此外試驗中應用酶標抗原的量較多。

          2、阻斷

          本法主要用于。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬?。≒R)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。

          下面以AP2型抗體的阻斷ELISA試劑盒檢測法為例介紹其操作程序:

          ① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

          ② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

          ③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

          ④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干

          ⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

          ⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

          ⑦ 用檢測儀測定OD值。

          上海晶抗生物工程有限公司

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