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          我司回答:關于細胞培養的具體步驟有哪些?
          更新時間:2020-07-21   點擊次數:1560次

          一、復蘇

              
          1.把凍存管從液氮中取出來,當即投入37℃水浴鍋中,細微搖擺(留意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管)。液體都消融后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

              
          2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
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          3.把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖擺,使培養皿中的細胞均勻分布。

              
          4.標好細胞品種和日期、培養人姓名等,放到37℃的5%CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。

              
          5.依據細胞增長速度2-3天換一次培養基。
           
              
          二、傳代

              
          1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

              
          2.把原有培養基吸掉。

              
          3.加恰當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

              
          4.細胞都變圓后參加等體積的含血清的培養基終止消化。

              
          5.用移液槍吹打細胞,讓細胞懸浮起來。

              
          6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。

              
          7.倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。

              
          8.依據細胞品種把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。持續培養。
           
              
          三、凍存

              
          把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞品種,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。

              
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