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          ELISA樣本處理方法
          更新時間:2021-12-30   點擊次數:1242次

          為了保證ELISA實驗數據的可靠性,在收集標本前都必須有一個完整的計劃。上海晶抗生物提倡新鮮樣品應盡早檢測,對收集后一周內檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。如有特殊原因需要周期性收集樣本,在取材后講標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差,蛋白容易降解,直接影響實驗質量,故應避免反復凍融。不同的樣本請根據實際情況處理。   


          樣品制備方法

          1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

          2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

          3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

          ELISA實驗

          4.細胞培養上清:檢測分泌性的成分時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成分時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

          5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

          6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

          7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


          備注:

          ELISA實驗樣本需清澈透明,如有沉淀物,請離心除去后再測;

          請勿使用溶血、高血脂或污染的樣本;

          凍結血清融解后可上下顛倒充分混勻宣輕緩, 不要強烈震蕩。

          上海晶抗生物工程有限公司

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