ELISA的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反響，并經過酶催化底物發作化學變化將抗原抗體反響經過色彩的方式顯現出來。

首要過程分為如下5個部分：
（1）將抗原抗體反響固相化：即實驗中的包被環節，使抗原或抗體吸附于固相載體外表。其機制可能是聚苯乙烯外表間的疏水基團能夠無挑選性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結構，堅持其生物學特性和免疫學活性；
（2）酶反響：酶能夠經過共價鍵與抗原或抗體銜接形成結合物，當抗原抗體反響的時分，被檢測靶方針中也結合了酶分子。
（3）底物反響：結合在抗原抗體中的酶分子，能夠促使底物發作色彩反響，檢測人員能夠裸眼調查，能夠經過色彩來判定是否有免疫反響的存在，經過色彩的深淺判別標本中相應抗原或抗體的含量，也可借用酶標儀在恰當的波長讀取吸光度值。
（4）關閉：固相吸附蛋白對錯特異性的，在包被意圖免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相外表依然有吸附其它蛋白的才能，為了保證抗原抗體反響的特異性，因而，包被剩下的固相外表應該用抗原抗體反響無關蛋白關閉。一般以為牛血清白蛋白是zui為抱負的關閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
（5）抗原抗體反響：抗原或抗體在恰當的介質下可進行特異的抗原抗體反響。