T4 RNA連接酶

英文名稱 ： T4 RNA Ligase

分子量 ： 43.6kDa，單體

級 別 ： BR

保 存 ： -20°C

來 源 ： 含有T4噬菌體克隆基因63的大腸桿菌

濃 度 ： 10u/ul

活性定義 ： 是指在37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol 5'-[32P]-(A)12-18轉(zhuǎn)化為磷酸酶抗性形式所需的酶量

酶活性分析混合物 ： 50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 10uM 5'-[32P]-(A)12-18(10uM 5'-末端）

保存液組分 ： 20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mM ELUGENT變性劑和50%(v/v)甘油

10×反應(yīng)緩沖液 ： 500mM HEPES-NaOH(PH8.0，25℃), 100mM MgCL2, 100mM DTT

抑制劑 ： 金屬螯合劑、SH基團修飾試劑

失 活 ： 70℃加熱10分鐘

質(zhì)量控制 ： 測試表明無內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染

備 注 ： 反應(yīng)體系中ATP的濃度取決于連接反應(yīng)的類型，推薦的BSA反應(yīng)濃度是0.1mg/ml

性 狀 ： 重組酶，催化ATP依賴的分子內(nèi)和分子間磷酸二酯鍵連接（5'-磷酸基團和3'-羥基末端），底物分子為多聚核苷酸、寡核苷酸、ssRNA和ssDNA，分子之間的小的連接底物是核苷3'，5'-二磷酸，而分子內(nèi)連接的小底物是8個堿基的寡核苷酸。配套提供反應(yīng)緩沖液、ATP和BSA溶液。催化3'→5'磷酸二酯鍵的形成，使核苷酸的5'-磷酸末端和5'-羥基末端連接。作用底物包括單鏈RNA、DNA及二核苷焦磷酸。隨酶提供10X 反應(yīng)緩沖液

用 途 ： 生化研究。連接RNA和RNA ；RNA3'-末端標(biāo)記胞嘧啶3'，5'-雙[a-32P]磷酸； tRNA的特異性修飾；合成寡核苷酸的環(huán)化；寡聚脫氧核糖核苷酸與單鏈cDNA連接，用于5'RACE（快速擴增cDNA末端）分析