PUC18質(zhì)粒

PUC18質(zhì)粒 

其他中文名稱 ： PUC18

級(jí) 別 ： BR

保 存 ： -20℃

濃 度 ： 450ug/ml

性 狀 ： 液體或粉末。pUC18是適合于雙脫氧法DNA測(cè)序的載體，通常運(yùn)用于重組dna的分子克隆中，首先我們制備大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞（能接受外來重組的dna），這種感受態(tài)菌株必須不同外來DNA分子發(fā)生遺傳重組，通常是rec基因缺陷型的突變體，同時(shí)它們必須是限制系統(tǒng)缺陷或限制與修飾系統(tǒng)均缺陷的菌株，即具有具有這三種缺陷（rk mk rec ），同時(shí)對(duì)氨芐青-霉素敏感（ap）。puc18載體自身帶有抗氨芐青-霉素基因，而外源片段不具有，這樣只有帶有puc18的轉(zhuǎn)化子的菌株才能在氨芐青-霉素平板上存活，而外源片段自身環(huán)化的不能存活，這稱為抗性篩選。pUC18 上帶有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 個(gè)氨基酸的編碼序列，在這個(gè)編碼區(qū)中插有一個(gè)多克隆位點(diǎn)，且不影響正常功能，DH5α感受態(tài)菌株帶有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的編碼信息，當(dāng)puc18載體在正常情況下同感受態(tài)菌株融合后，互補(bǔ)表達(dá)具有酶活性的蛋白質(zhì)，稱為α-互補(bǔ)現(xiàn)象，當(dāng)有外源片段插入多克隆位點(diǎn)后，互補(bǔ)現(xiàn)象消失，其形成的菌株顏色具有很大的差異，很容易鑒別，這種篩選方法稱為α-互補(bǔ)現(xiàn)象篩選。由上可見，puc18載體除了能重組導(dǎo)入外源片段外，在篩選表達(dá)過程中還具有重要的作用

用 途 ： 生化研究。克隆外源基因。利用lac promoter進(jìn)行基因表達(dá)。使用M13 primers進(jìn)行DNA測(cè)序。